X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。
X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活,MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并zui终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。
用 途:
(1)α-半乳糖苷酶的显色底物,形成蓝色沉淀。在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays;
(2)用于区分肠杆菌科内的不同菌种以及区分双歧杆菌和乳酸菌;
(3)在组织化学中用于酶活性的检测;
储存液的配制及使用步骤:
A)涂布于预制平板:溶解24mg X-α-gal于6 mL DMF,终浓度为4mg/ mL的溶液。
①涂布200ul(15cm) 或者100ul(10cm)X-α-gal 储存液于预制平板上;
②放于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,zui长可放4小时);
③将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。
B)直接加入琼脂中:溶解60mg X-α-gal于3 mL DMF,终浓度为20mg/ mL的溶液。
①将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55 ℃;
②往已冷却的培养基中直接加入2 ml -10 ml 20 mg/ ml X-α-Gal储存液,混匀,快速倒平板。
外 观:白色或灰白色结晶粉末,或者无色结晶;
溶 解 度(1%甲醇溶液):无色,清澈;
储 存: -15°C避光避潮保存;
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